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Pregnancy-Associated Plasma Protein A (PAPP-A)の分離抽出

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解題/抄録

書誌の解題/抄録
我々は, ゲル濾過クロマトグラフィー・Heparin-Sepharoseアフィニティークロマトグラフィー・DEAE-Sephacelクロマトグラフィーを用い, 新たに開発した3段階クロマトグラフィー法によって, Pregnancy-Associated Plasma Protein-A (PAPP-A)を分離抽出した. 最初に正常妊娠末期母体血清30ml中の血清蛋白質をゲル濾過クロマトグラフィーによって分子量に従い分離した. ラジオイムノアッセイ(RIA)法により, PAPP-Aは高分子領域分画中に検出され, 母体血清中総PAPP-A量の91%がゲル濾過クロマトグラフィーにより溶出回収された. 次にこのPAPP-A含有分画をHeparin-Sepharose アフィニティークロマトグラフィーを用い, それぞれNaCl 0.15M, 0.30M及び0.60M含有の0.05Mトリス緩衝液にて順次分離溶出した. NaCl 0.60M緩衝液によりカラムに添加した総PAPP-A量の93%が回収された. さらにこのPAPP-A含有分画をDEAE-Sephacelクロマトグラフィーを用い, それぞれ0.15M, 0.30M及び0.45M NaCl含有酢酸緩衝液(pH 5.5)により順次分離溶出した. 0.30M緩衝液によりカラムに添加した総PAPP-A量の91%が回収された. 最後にPAPP-A含有分画を脱塩した後10倍に濃縮し, 3.8 IU (1.7mg)のPAPP-Aを得た. 本法により母体血清中総蛋白量の99%が除去され, 総PAPP-A量の74%が回収された. 分離抽出操作の前後で総蛋白量に対する総PAPP-A量の比(mIU : PAPP-A/mg : Protein)は526倍となり, 純度(mg : PAPP-A/mg : Protein)は68.4%となった. 精製された蛋白質はSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法(SDS-PAGE)にて, 200kDa上の単一なバンドとして観察され, またWestern blotting法により, 分離抽出された主な蛋白質がPAPP-Aであることが示された. また交叉免疫電気泳動法及びTandem交叉免疫電気泳動法により, 今回我々が分離抽出したPAPP-Aは以前より使用されてきたTeisner et al.によるPAPP-Aと免疫学的に相同であることが示された. 今回新たな方法を用いて分離抽出されたPAPP-Aは純度が高いため, 今後より鋭敏で簡便な測定系の開発と, 標準品として広く利用されることが期待できると同時に, PAPP-Aの生体内での生物学的役割を明らかにするための, 基礎的研究に利用されると考えられる.

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